新城疫病毒M蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

摘要：

为获得新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)M蛋白单克隆抗体,本研究将编码该蛋白的基因克隆、表达并纯化重组蛋白,作为免疫原免疫小鼠,同时建立ELISA筛选方法对小鼠血清效价进行测定,筛选出血清抗体效价最高的小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,最终获得能稳定产生NDV M蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并进行了抗体的免疫荧光、Western blotting、亚类的鉴定、杂交瘤细胞染色体计数、小鼠腹水制备及腹水内单克隆抗体效价测定.结果显示,PCR、重组质粒测序及双酶切鉴定正确,M基因大小约为1095 bp.SDS-PAGE和Western blotting检测显示,试验成功表达了重组M蛋白,分子质量约为60 ku,且可与NDV阳性血清反应.建立的ELISA筛选方法中,重组M蛋白、His标签蛋白和抗体的最佳工作浓度分别为0.5μg/mL、0.5μg/mL和1:256000.抗体的免疫荧光、Western blotting、亚类的鉴定显示,杂交瘤细胞产生的抗体可与NDV SG10株及重组M蛋白特异性结合,其轻链为κ,重链为IgG2A.C9-G2、D3-F2杂交瘤细胞染色体计数结果分别为97和101条;杂交瘤细胞上清的ELISA检测效价均为1:6400,腹水的ELISA检测效价分别为1:409600和1:102400.本研究成功制备了NDV M蛋白的单克隆抗体,可为进一步研究M蛋白的功能提供工具.

关键词：新城疫病毒(NDV);M蛋白;单克隆抗体

所属期刊栏目：48

分类号：S852.65+7(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金项目32002276

在线出版日期：2021-09-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：3423-3431