基于大片吸虫分泌排泄产物层析组分的牛片形吸虫病间接ELISA诊断方法的建立

摘要：

为建立更敏感、特异的牛片形吸虫病早期诊断方法,本试验将收集的大片吸虫分泌排泄产物(Fasciola gigantica excretory-secretory products,FgESP)进行凝胶过滤层析并从中筛选出检测效果最优的UV280吸收峰,从此峰对应的组分中筛选出诊断效果最优的层析组分后将其作为抗原,通过棋盘滴定试验优化抗原包被浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度、显色时间等,确定临界值,建立牛片形吸虫病间接ELISA诊断方法.对建立的方法进行敏感性和特异性试验,检测试验感染0～14周的水牛血清和临床160份水牛血清样本,并与已有的诊断抗原FgESP(阴阳临界值为0.320)进行诊断效果比较.结果 显示,层析组分F22具有较优的检测效果.间接ELISA的最佳反应条件为:F22抗原包被浓度0.157 μg/mL,待测血清与酶标二抗的稀释度分别为1:400和1:40000,显色时间为25 min.应用建立的方法检测15份水牛阴性血清,确定D450nm阴阳性临界值为0.408.比较F22与FgESP发现,二者特异性相似,但F22作为抗原的敏感性高于FgESP.检测试验感染大片吸虫的水牛0～14周血清,结果表明,从感染第2周开始F22-IgG水平极显著高于FgESP-IgG水平(P＜0.01),因此,F22比FgESP诊断效果更优.对160份水牛血清检测发现,F22阳性检出率为71.25％,FgESP阳性检出率为63.75％.上述结果表明,相比于FgESP,以F22作为诊断抗原建立的大片吸虫病间接ELISA诊断方法敏感性更高,可更有效地进行牛大片吸虫病的早期诊断.

关键词：大片吸虫;诊断抗原;ELISA

所属期刊栏目：48

分类号：S855.9(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划2017YFD0501202

在线出版日期：2021-09-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：3010-3018