小尾寒羊SP1基因克隆及其对前体脂肪细胞分化的影响

摘要：

试验旨在对小尾寒羊特异性蛋白1(specificity protein 1,SP1)基因进行克隆和序列分析,并研究SP1基因对前体脂肪细胞分化的影响.选取1月龄小尾寒羊尾部脂肪组织进行前体脂肪细胞的分离、培养和诱导分化;用重叠PCR法克隆SP1基因编码区(coding DNA sequence,CDS);用生物信息学软件分析SP1基因CDS,并对其编码蛋白的结构、功能结构域、亚细胞定位、翻译后修饰进行预测;用慢病毒包装SP1基因过表达、干扰及对照质粒转染293T细胞后,收取病毒液感染小尾寒羊前体脂肪细胞;用油红O染色检测脂滴沉积能力;用实时荧光定量PCR检测SP1基因和成脂标志基因的mRNA表达量.结果表明,小尾寒羊SP1基因CDS全长2 340 bp,编码779个氨基酸;序列相似性分析显示,小尾寒羊SP1基因CDS及其编码序列与绵羊、山羊的相似性最高,其次是牛、马、猪、人、小鼠、大鼠,与鸡的相似性最低,系统进化分析结果与之相符;SP1蛋白定位于细胞核,有109个磷酸化位点,其二级结构由α-螺旋、β-转角、无规则卷曲和延伸链4种结构组成,所占比例分别为16.94％、8.60％、54.17％和20.28％,二级结构和三级结构均存在3个锌指结构域;过表达、干扰及对照质粒转染293T细胞,每组细胞皆出现较强绿色荧光,载体成功转染至293T细胞;病毒液感染小尾寒羊前体脂肪细胞并分化12 d后,过表达组SP1基因表达量极显著高于对照组(P＜0.01),干扰组SP1基因表达量极显著低于对照组(P＜0.01);过表达SP1基因极显著上调成脂标志基因mRNA的表达量(P＜0.01),产生更多脂滴;干扰SP1基因则结果相反.因此,SP1基因对小尾寒羊尾部前体脂肪细胞分化具有正向调控的作用.

关键词：小尾寒羊、SP1基因、克隆、前体脂肪细胞、分化

所属期刊栏目：48

分类号：S811.3(普通畜牧学)

资助基金：山西省工程重点学科建设计划;山西农业大学科技创新项目

在线出版日期：2021-07-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共14页

页码：1544-1557