布鲁氏菌分泌蛋白BspD多克隆抗体制备及其生物信息学分析

摘要：

本研究旨在获得布鲁氏菌BspD蛋白,制备其多克隆抗体,并分析其潜在生物学功能.根据流产布鲁氏菌(Brucella abortus)2308的BspD基因序列(GenBank登录号:NC_007618.1)获得BspD基因序列,对布鲁氏菌BspD氨基酸序列进行生物信息学分析,然后将目的基因嵌入pMD19-T载体,使用限制性内切酶切下目的基因重组入pET-28a(+)载体,构建pET28a-BspD重组载体,经过双酶切、测序验证后,IPTG诱导表达菌株,SDS-PAGE法鉴定BspD的表达,His标签蛋白纯化柱纯化BspD蛋白,BCA试剂盒检测蛋白浓度.用纯化BspD蛋白免疫新西兰大白兔,Western blotting鉴定多克隆抗体的特异性,间接ELISA法检测抗体的效价及反应原性.结果表明,成功表达出37 ku BspD蛋白,BCA方法测得纯化BspD浓度为2 000 μg/mL;Western blotting结果显示制备的抗体具有良好的特异性,间接ELISA检测出BspD多克隆抗体的效价为1 ∶ 12 800,成功制备出BspD多克隆抗体,但其反应原性较低.生物学信息分析得出BspD蛋白具有亲水性,存在跨膜区,无信号肽,有17个磷酸化位点和11个抗原决定簇,BspD蛋白二级结构以α-螺旋为主,达到86.80％,还存在少量延伸链、无规则卷曲、β-折叠等;在线软件Phyre 2构建BspD三级结构证实其多为α-螺旋.以上结果可为进一步研究布鲁氏菌分泌蛋白BspD的功能及分子机制提供参考.

关键词：布鲁氏菌、BspD分泌蛋白、生物信息学分析、多克隆抗体

所属期刊栏目：48

分类号：S852.6+14(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划"畜禽重要胞内菌基因调控及其与宿主互作的分子机制"2017YFD0500302、2017YFD0500304

在线出版日期：2021-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：676-684