猪伪狂犬病病毒流行株gE蛋白表达及其多克隆抗体制备

摘要：

本研究旨在获得重组伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白及其多克隆抗体.利用PCR方法从PRV感染猪的肺脏、脑和扁桃体混合组织中扩增PRVgE基因,连接至克隆载体pMD18-T(pMD-gE)后进行测序与进化树分析.以pMD-gE为模板,利用PCR方法扩增其膜外结构域部分基因(gE-outside),将其连接至原核表达载体pET-30a(+),转化大肠杆菌DH5a感受态细胞,构建重组质粒pET-gE-outside.将重组质粒pET-gE-outside转化大肠杆菌RosettaTM(DE3)pLysS感受态细胞,经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE和Western blotting进行表达产物的分析与鉴定.经亲和层析技术纯化重组PRV gE蛋白并免疫小鼠,通过间接ELISA和Western blotting分别进行三免3周血清中鼠抗PRV gE多克隆抗体效价的测定和鉴定.PCR和测序结果表明,本研究成功克隆了PRV gE基因,与国内2011年以后流行毒株属于相同分支.SDS-PAGE和Western blotting结果证实,PRV gE-outside基因在原核表达系统获得正确表达,分子质量约为55 ku,且可与猪抗PRV多克隆抗体发生免疫反应.经亲和层析纯化的gE-outside蛋白浓度为1.23 mg/mL.将其免疫小鼠,三免3周的小鼠血清中鼠抗PRV gE-outside多克隆抗体效价为1∶204 800,并可与gE-outside蛋白发生免疫反应.综上,本研究制备了重组PRV gE蛋白和鼠抗PRV gE蛋白多克隆抗体,可为PRV感染机制研究及建立快速、高效免疫学检测技术提供技术指导和材料.

关键词：伪狂犬病病毒(PRV)、gE蛋白、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：48

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：河南省科技攻关项目;信阳农林学院校级科技创新团队

在线出版日期：2021-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：631-639