水貂肠炎病毒VP2基因原核表达及病毒样颗粒制备

摘要：

试验旨在制备水貂肠炎病毒(Mink enteritis parvovirus,MEV)可溶性VP2蛋白及其病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs).优化并合成MEV VP2基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),将重组质粒pET-30a-VP2与分子伴侣pTf16共同转化到宿主菌ER2566中,以不同培养温度、L-阿拉伯糖浓度和IPTG浓度进行诱导表达,收集样品进行SDS-PAGE和Western blotting分析.通过硫酸铵沉淀结合蔗糖密度梯度离心法对表达产物进行纯化,由SDS-PAGE进行鉴定,透析去除蔗糖,通过动态光散射技术(DLS)和透射电子显微镜(TEM)观察不同组装条件下VLPs的粒径和形态.用制备的MEV VLPs疫苗免疫水貂评价其免疫原性.结果显示,以2 g/L L-阿拉伯糖、0.2 mmol/L IPTG、25 ℃培养16 h为诱导条件时,VP2蛋白在大肠杆菌中可溶性表达,分子质量约为65 ku.经Western blotting鉴定VP2蛋白具有良好的抗原特异性.将此表达产物利用硫酸铵沉淀结合蔗糖密度梯度离心法纯化后,纯度可达90％以上.在pH 8.0,150 mmol/L NaCl的透析液中,VP2经自组装可形成与天然MEV形状和粒径相似且具有血凝特性(1∶214)的VLPs.VLPs疫苗免疫水貂21 d后,测得水貂血清中的血凝抑制(HI)抗体水平均相对最高,可达1 ∶ 211,说明该VLP疫苗有较好的免疫原性,能有效预防MEV的感染.本试验结果表明,将pET-30a-VP2与pTf16在原核表达系统中共表达,可获得具有高免疫原性的VLPs,为后期MEV VLPs疫苗的研发奠定基础.

关键词：VP2、原核表达、pTf16、病毒样颗粒

所属期刊栏目：48

分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：吉林省科技发展计划重点研发项目"貉细小病毒基因工程亚单位疫苗的研制"20200402110NC

在线出版日期：2021-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：433-442