猫传染性腹膜炎病毒N蛋白在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达与鉴定

摘要：

本研究旨在利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达猫传染性腹膜炎病毒(Feline infectious peritonitis virus,FIPV)N蛋白,并制备抗该蛋白的多克隆抗体,用于FIPV临床抗原/抗体诊断及N蛋白功能研究.参考GenBank中FIPV的N基因序列,选择FIPV毒株N基因(登录号:KC461235.1),并对该N基因进行密码子优化、基因合成,酶切后将N基因连接至pFastBac1载体,转化大肠杆菌DH5a感受态细胞,经氨苄西林抗性筛选阳性克隆,提取质粒经酶切及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选及PCR鉴定后,最终成功构建重组杆状病毒质粒Bacmid-N,转染Sf9细胞包装杆状病毒,于28 ℃温箱培养4d后收集感染Sf9细胞上清,并通过镍离子亲和层析纯化获得重组N蛋白.经SDS-PAGE及Western blotting鉴定结果表明,本研究成功利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达出大小约为51 ku的FIPV重组N蛋白.将该蛋白与弗氏佐剂按一定比例混合后,免疫6周龄BALB/c小鼠.用间接ELISA方法检测小鼠血清抗体效价可达1∶102 400;利用Western blotting和间接免疫荧光试验对N蛋白多克隆抗体进行检测分析,结果表明,真核表达的重组蛋白免疫原性良好,多克隆抗体具有良好的反应原性,可特异识别FIPV感染细胞.本研究为FIPV抗原/抗体诊断试剂盒的研发奠定了基础.

关键词：猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)、核衣壳蛋白、昆虫细胞-杆状病毒表达系统

所属期刊栏目：48

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划"畜禽重大疫病防控与高效安全养殖综合技术研发"2016YFD0501004

在线出版日期：2021-03-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：273-279