基于单克隆抗体捕获的猪血清和乳汁中PEDV IgA抗体间接ELISA方法的建立和评估

摘要：

为快速准确地评价猪血清和乳汁中猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea Virus,PEDV)IgA抗体水平,本研究从4株PEDV单克隆抗体中筛选得到1株可高效捕获PEDV全病毒粒子(灭活的病毒细胞培养原液)的特异性IgG单克隆抗体8A3,将其用作检测孔内的包被抗体以捕获病毒粒子制备抗原板,从而建立了用于检测母猪血清和乳汁中PEDV特异性IgA抗体的间接ELISA方法.该方法中,单克隆抗体8A3的最适包被浓度为6.0μg/mL,阴性判定临界值(D 450 nm)为0.34,且在检测中不与常见的猪病毒阳性血清反应.与传统的免疫过氧化物酶单层检测(immuno-peroxidase monolayer assay,IPMA)相比,所建立的ELISA方法检测阳性和阴性血清的符合率分别为98.7％(152/154)和98.0％(145/148);检测初乳和乳汁样品的阳性和阴性符合率分别为100％(60/60)和95.8％(23/24);检测初乳和泌乳期样品中的IgA水平与中和效价的趋势高度相关(kappa=0.835).本研究建立的检测PEDV IgA的间接ELISA方法灵敏度、敏感性和特异性与传统方法高度一致,可简化检测步骤,适用于大规模评价临床样本乳汁和血清中PEDV IgA抗体的快速检测.

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV)、单克隆抗体(MAb)、IgA抗体、间接ELISA

所属期刊栏目：47

分类号：S852.65+9.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：郑洛新国家自主创新示范区创新引领型产业集群项目181200211700

在线出版日期：2020-07-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：2248-2255