原代奶牛子宫内膜上皮细胞体外培养方法的改进

摘要：

目前利用奶牛子宫内膜上皮细胞体外培养技术,建立奶牛子宫内膜炎模型从而减少不可控因素来研究奶牛子宫内膜炎疾病已成为国内外普遍使用的一类方法,因此获得高纯度、同一性的子宫内膜上皮细胞是体外研究的关键环节,国内外所使用方法主要是酶消化法、组织块贴壁法和组织块消化贴壁法.本文旨对先前的方法进行改良,建立一种简便易行、培养周期短、细胞活性及形态良好的原代奶牛子宫内膜上皮细胞体外培养技术.采用健康未孕奶牛子宫为试验材料,取下子宫内膜组织,加入5 mL含2％双抗、40％胰酶的DM EM/F12培养基,4 ℃消化12 h,再将组织移至25 cm2 细胞培养瓶中贴壁培养.获得原代细胞后,应用角蛋白-18抗体对细胞进行免疫组化荧光鉴定,并对第3代细胞采用CCK-8法测定不同时间点的 D450 nm值,绘制细胞生长曲线.结果显示,培养至第8天,原代细胞基本铺满细胞培养瓶瓶底,有效地缩短了常规组织块贴壁法的周期.通过角蛋白-18免疫组化荧光鉴定,原代上皮细胞的阳性率可达98％以上,相比常规组织块贴壁法来说,纯度明显提高,省去了细胞纯化的操作步骤.细胞增殖状态,符合正常的分裂生长特性.试验结果表明将常规组织块贴壁法进行了优化改良,不仅缩短了培养周期,同时提高纯度,保持细胞活性,为原代奶牛子宫内膜上皮细胞体外培养技术的改良提供一定的参考.

关键词：奶牛子宫内膜上皮细胞、细胞培养、细胞鉴定

所属期刊栏目：47

分类号：S823.9+1(家畜)

资助基金：河北农业大学引进人才科研专项ZD201723;河北省科技厅项目"奶牛主要胎产病高效综合防治及安全用药关键技术研究"19226630D;河北省现代农业产业技术体系奶牛创新团队建设疫病防控项目HBCT2018120205

在线出版日期：2020-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：958-964