犬UC-MSC-Exo来源miRNA表达分析及其cfa-miR-34a/-143对血管内皮细胞增殖的影响

摘要：

试验旨在分离鉴定犬脐带间充质干细胞分泌的外泌体(UC-MSC-Exo),并研究犬 UC-MSC-Exo 来源miRNA的表达情况及其对血管内皮细胞(VEC)增殖的影响.采用超高速离心法从犬脐带间充质干细胞培养上清中分离外泌体,采用Western blotting 、透射电镜和纳米颗粒跟踪分析法(NT A)进行鉴定.通过对犬UC-MSC-Exo中的miRNA进行测序,筛选出2个目标miRNA(cfa-miR-34a和cfa-miR-143)并合成相应的mimic和inhibitor,转染犬VEC;采用荧光显微镜和实时荧光定量PCR法检测mimic和inhibitor转染情况及其转染效率;CCK-8法检测转染mimic和inhibitor对犬VEC增殖能力的影响,并对其靶基因进行预测.结果显示,犬UC-M SC-Exo表达特异性的外泌体表面蛋白CD9 、CD63和CD81,粒径集中在100～200 nm,电镜检测成典型的杯状.免疫荧光结果表明,miRNA mimic和inhibitor均已转染进细胞内,并且聚集于细胞质中;实时荧光定量 PCR结果表明,转染cfa-miR-34a mimic和cfa-miR-143 mimic后,细胞内cfa-miR-34a和cfa-miR-143表达量分别升高约400和78倍;而转染cfa-miR-34a inhibitor和cfa-miR-143 inhibitor后,细胞内cfa-miR-34a和cfa-miR-143表达量分别降低了77％和83％;CCK-8检测结果表明,cfa-miR-34a和cfa-miR-143在体外可极显著促进血管内皮细胞的增殖(P＜0.01).cfa-miR-34a靶基因预测结果发现,共有195个保守靶位点,与miRDB预测结果共有69个交集靶基因;cfa-miR-143则有448个保守靶基因,其与miRDB预测结果有128个交集靶基因.本试验成功分离得到犬 UC-MSC-Exo,且证实目标miRNA cfa-miR-34a和cfa-miR-143在体外可极显著促进VEC增殖.

关键词：脐带间充质干细胞(UC-MSC)、外泌体、miRNA、血管内皮细胞、增殖

所属期刊栏目：47

分类号：S829.2(家畜)

资助基金：广东省自然科学基金2017A030313171;广东省自然科学基金2018A030313893

在线出版日期：2020-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：676-685