β2m基因在猪肾细胞系PK-15中的表达研究

摘要：

为研究猪肾细胞系PK-15中Beta 2微球蛋白(Beta 2 microglobulin,β2m)基因的表达情况,提取细胞总RNA,经RT-PCR扩增β2m.回收后的基因克隆至pMD18-T载体,获得重组质粒,经EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切筛选后,阳性克隆送生物公司测序.序列经GENETYX version 9.0编辑分析,通过DNAMAN version 5.2.2与其他猪β2m基因进行序列比对分析,利用Mega 5.0的NJ法进一步分析其与其他物种β2m的分子进化关系,并在此基础上利用SWISS-MODEL和PDBsum预测该基因编码的成熟肽二级结构和三级结构.提取PK-15总蛋白,Western blotting检测和分析细胞中β2m的表达.结果 显示,经RT-PCR扩增,成功获得β2m条带,大小约360 bp.经测序发现PK-15-β2m基因为364 bp,共编码118个氨基酸,其中成熟肽为98个氨基酸,N端信号肽含有20个氨基酸.序列分析证实PK-15细胞中β2 m基因未发生突变;分子进化分析显示,PK-15-β2m与牛的亲缘关系最近,其次为羊、马等.多重序列比对发现,PK-15-β2m与牛、羊、马β2m成熟肽均为98个氨基酸,而其他物种β2m成熟肽为99个氨基酸;二级结构预测显示,PK-15-β2m成熟肽主要以β-折叠、β-转角和m-转角为主,不含有α-螺旋.三级结构预测显示,PK-15-β2m成熟肽主要由7条β-折叠条带构成.Western blotting分析显示β2m在细胞中成功表达.本研究证实了猪肾细胞系PK-15中β2m在核酸和蛋白质水平均稳定表达,为下一步研究PK-15细胞的抗原递呈功能奠定了基础.

关键词：猪肾细胞、PK-15、β2m、克隆、表达

所属期刊栏目：47

分类号：S852.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目:;CRISPR/Cas9技术构建sT2细胞系筛选猪源病毒SLA-Ⅰ限制性CTL表位的研究;辽宁省教育厅重点实验室项目;大连大学创新创业训练计划项目

在线出版日期：2020-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：372-380