羊种布鲁氏菌M5-90疫苗株铁应答调控因子irr和rirA基因缺失株的构建与鉴定

摘要：

为研究铁调控因子irr和rirA在羊种布鲁氏菌(Brucellamelitensis)感染过程中的作用,本研究通过卡那替换的方法构建两个缺失株M5-90Δirr和M5-90ΔrirA,分别将亲本株和缺失株在相同营养条件下培养36 h,观察其振荡培养时的生长变化趋势.分别将1×108 CFU M5-90Δirr、M5-90ΔrirA和M5-90接种到含1.5 mol/L NaCl、pH 2.5、pH 11.5、10 mmol/L H2O2的1 mL布鲁氏菌液体培养基,比较缺失株和亲本株在不同条件下的生长特性;分别以1×106 CFU M5-90Δirr、M5-90ΔrirA和M5-90感染小鼠巨噬细胞RAW264.7检测缺失株的黏附、侵袭和胞内生存能力.结果 显示,在相同体外培养条件下缺失株M5-90Δirr和M5-90ΔrirA生长速度明显低于亲本株;M5-90Δirr、M5-90ΔrirA在高盐、强酸和强碱环境下生存率均显著或极显著低于亲本株(P＜0.05;P＜0.01),在H2O2条件下这两个缺失株的生存率却显著高于亲本株(P＜0.05).与亲本株相比,缺失株在小鼠巨噬细胞RAW264.7内的侵袭和黏附能力均减弱,在感染后45 min缺失株M5-90Δirr和M5-90ΔrirA的黏附和侵袭能力均极显著低于亲本株(P＜0.01),但在感染后24 h,这两个缺失株在细胞内繁殖能力与亲本株相比有所增强.本研究报道了irr和rirA基因不仅调控了羊种布鲁氏菌的生长,同时对细菌黏附和侵袭能力也产生一定的影响,M5-90Δirr和M5-90ΔrirA是两株具有潜力的布鲁氏菌候选疫苗株.

关键词：羊种布鲁氏菌、铁应答调控因子、irr基因、rirA基因、毒力

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分类号：S852.61(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目31760020、31572491、U1803236

在线出版日期：2020-06-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：8-17