肝螺杆菌CdtB基因缺失株的构建与验证

摘要：

试验旨在敲除肝螺杆菌(Helicobacter hepaticus,H.hepaticus)的CdtB基因,采用pcDNA质粒构建自杀质粒,用于敲除肝螺杆菌ATCC 51449菌株CdtB基因.根据同源重组原理,通过电击转化方法将质粒转入肝螺杆菌构建肝螺杆菌CdtB基因缺失株(ΔCdtB).采用PCR及测序技术对ΔCdtB缺失株进行鉴定.采用生化试验、生长曲线测定检测ΔCdtB缺失株与野生型肝螺杆菌区别.结果 显示,获得以质粒pcDNA构建的同源重组敲除质粒pcDNA-ΔCdtB,电击转化肝螺杆菌后经过传代筛选可获得氯霉素阳性转化子.缺失株替换片段的PCR产物为964 bp,大于野生型肝螺杆菌对应产物884 bp,测序结果表明,氯霉素抗性基因已替换了CdtB基因.比较发现,ΔCdtB缺失株与野生型菌株的尿素酶试验结果均呈阳性,并且在生长速率方面与普通血琼脂平板上无显著差异,但最终缺失株在含氯霉素的血琼脂平板上生长更多.除此之外,将获得的缺失株持续传代并进行PCR鉴定未发现回复突变,有较好的遗传稳定性.综上所述,本研究构建的基因敲除质粒pcDNA-ΔCdtB实现了对肝螺杆菌中目标基因的敲除,为肝螺杆菌基因功能研究和致病因子的发掘提供了有效的基因操作工具.

关键词：肝螺杆菌、基因敲除、质粒、同源重组

所属期刊栏目：47

分类号：R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：江苏省优势学科、扬州大学高端人才支持计划

在线出版日期：2020-06-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1-7