羊口疮病毒大足株的分离鉴定

摘要：

本研究旨在了解重庆地区羊口疮病毒(orf virus,ORFV)流行情况.从重庆大足等地区羊场采集18份临床疑似羊口疮病料,提取病料DNA,经PCR鉴定为ORFV阳性;将阳性病料做常规处理,接种羔羊睾丸细胞(LT),并盲传至5代,观察接毒LT细胞病变,将F5代细胞培养物进行间接免疫荧光试验(IFA)、PCR扩增、测序、同源性比对、遗传进化分析和TCID50测定.结果 显示,经PCR检测,18份疑似羊口疮病料ORFV核酸阳性率为61.1％(11/18);大足株病料接种LT细胞36 h后,长梭型细胞变圆、融合、呈拉网状、皱缩,72 h后大部分细胞脱落;间接免疫荧光试验在显微镜下观察到细胞浆中出现特异性绿色荧光,且荧光绕核分布;F1至F5代细胞培养物经PCR扩增出特异性目的条带,大小为1 137 bp;将测序结果与GenBank中19株ORFV B2L基因进行同源性比对,其核苷酸同源性在97.9％～100％之间,与美国SA00分离株同源性达100％,且遗传进化分析显示处于同一进化分支,亲缘关系较近;测定F5代细胞培养物TClD50值为10-5.68/0.1 mL,在细胞中能稳定增殖.综上所述,本研究成功分离并获得1株ORFV,为后续ORFV研究提供了生物材料,同时为防控重庆地区的羊口疮奠定基础.

关键词：羊口疮病毒(ORFV)、分离鉴定、遗传进化分析

所属期刊栏目：46

分类号：S852.65+4(动物医学（兽医学）)

资助基金：贵州省科技计划项目;贵州省科技厅基础研究项目

在线出版日期：2020-01-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：3725-3732