鼠伤寒沙门菌LH430株asd基因缺失株平衡致死系统的构建及生物学特性分析

摘要：

本研究旨在构建基于减毒鼠伤寒沙门菌的平衡致死系统.将打靶基因片段Cat基因重组入鼠伤寒沙门菌LH430株asd基因位置,之后将温敏型质粒pCP20转入菌体中用以消除Cat基因片段,通过PCR技术两步法筛选出缺失株Δasd LH430;将asd+的原核表达质粒pYA3493转入Δasd LH430,经PCR及测序鉴定表明鼠伤寒沙门菌平衡致死系统Δasd LH430 (pYA3493)构建成功.对构建的基因缺失株研究表明,该缺失株失去了在二氨基庚二酸(DAP)阴性环境中生存的能力;糖发酵试验表明,缺失菌株在利用碳源的能力方面与亲本菌株保持一致;9种生化试验结果显示,缺失菌株遗传了亲本菌株的生化特性;遗传稳定性试验表明,缺失菌株能够稳定遗传缺失的423 bp的基因片段;将绿色荧光基因转入所构建的平衡致死系统,成功构建携带绿色荧光基因的重组菌ΔasdLH430 (pYA-gfp),对其研究表明该重组菌能够有效表达绿色荧光蛋白.本研究成功构建了鼠伤寒沙门菌平衡致死系统Δasd LH430 (pYA3493),能够有效表达所携带的基因,该系统可作为疫苗活载体来携带外源基因.

关键词：鼠伤寒沙门菌、平衡致死系统、活疫苗载体、生物学特性

所属期刊栏目：46

分类号：R378.2+3(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家高技术研究发展计划项目2011AA10A210;国家自然科学基金青年基金项目31802170;安阳工学院博士科研启动基金项目BSJ2016013

在线出版日期：2019-12-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：3341-3349