H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体IPMA检测方法的建立

摘要：

本试验旨在建立一种针对检测抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)筛选方法.通过优化MDCK细胞接毒量、细胞接毒后培养时间、封闭液的种类和工作浓度、工作时间等各个反应条件,并对建立的IPMA筛选方法的特异性、敏感性和重复性进行评价.结果 显示,建立的IPMA检测方法的最优反应条件为MDCK细胞接毒102.63 TCID50/100 μL HlN1亚型猪流感病毒,37℃培养24 h,含3‰H2O2的甲醇室温固定15 min,5％脱脂乳37℃封闭2h,50μL杂交瘤细胞上清作为一抗,37℃孵育2h,羊抗鼠HRP-IgG二抗37℃孵育lh.所建立的IPMA方法能特异性地检测H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪瘟病毒(CSFV)阳性血清不发生交叉反应;其敏感性检测结果显示,可检测1:3 200的HI=2-9标准H1N1猪阳性血清;批间和批内重复性试验结果较好.综上所述,本试验成功建立了抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的IPMA检测方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,为生产鉴定H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体提供了一种简便、实用、有效的检测手段.

关键词：H1N1亚型猪流感病毒、免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)、单克隆抗体

所属期刊栏目：46

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划2016YFD0500701

在线出版日期：2019-10-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：2691-2698