猪硒蛋白W的原核表达及IgY多克隆抗体制备

摘要：

试验旨在优化硒蛋白W(selenoprotein W,SelW)的原核表达系统,并评估SelW的免疫原性和基于IgY抗体检测猪体内SelW的可行性.将获得的猪SelW基因序列密码子进行优化、合成并连接至pET-32a(+)表达载体中,构建原核表达重组质粒pET32a(+)-SelW,转化E.coli BL21 (DE3)宿主菌中,进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定重组猪SelW的表达情况,并免疫产蛋鸡制备抗SelW的IgY多克隆抗体,通过间接ELISA检测IgY抗体滴度,采用Western blotting检测IgY识别抗原的特异性.SDS-PAGE结果显示,SelW基因在原核细胞中成功表达,得到了大小约为33 ku的重组蛋白,IPTG最佳诱导浓度及时间分别为0.5 mmol/L和6h;可溶性分析结果显示,重组蛋白SelW主要以包涵体形式存在.间接ELISA检测结果显示,免疫后45 d的IgY多克隆抗体的效价可达1∶51 200.Western blotting检测结果显示,重组蛋白具有良好的免疫原性,所制备的IgY抗体与SelW的亲和力较高.本试验成功构建并优化了SelW蛋白的原核表达系统,提高了SelW蛋白的表达量,获得了具有良好免疫原性的SelW蛋白,制备的IgY抗体能特异性识别猪肌肉组织中的SelW,可用于检测猪组织中SelW的表达、预防硒中毒和缺硒性疾病的监测等,为进一步探究SelW的生物学功能奠定基础.

关键词：猪、硒蛋白W(SelW)、原核表达、IgY多克隆抗体

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分类号：S828(家畜)

资助基金：乌鲁木齐市科技计划项目P16130001;陕西省国际科技合作项目2017KW-ZD-10;河南省高校科技创新人才支持计划18HASTIT035;河南省高等学校重点科研项目应用研究计划19B180001;安阳工学院博士启动金BSJ2017002

在线出版日期：2019-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1801-1807