siRNA抑制牛子宫内膜上皮细胞Nrf2基因的表达研究

摘要：

为探讨核因子E2相关因子(nuclear factor E2 related factor,Nrf2)基因沉默及激活后对牛子宫内膜上皮细胞的影响,本试验利用小分子干扰(siRNA)技术及Nrf2的激动剂叔丁基对苯二酚(tBHQ),分别从Nrf2基因的下调和上调表达来研究Nrf2对牛子宫内膜上皮细胞中血红素加氧酶-1(HO-1)和Homebox A10 (HOXA10)基因表达的影响.结果 显示,经实时荧光定量PCR方法检测,在设计的2条siRNA序列(siRNA-1209和siRNA-1672)中,siRNA-1672在终浓度为75 nmol/L、作用时间24 h时抑制效果较好,抑制效率在80％以上;经Western blotting方法检测,Nrf2蛋白表达水平在转染后96 h极显著下降(P＜0.01),而HO-1和HOXA10的mRNA表达量分别下降了60％和70％(P＜0.01),蛋白表达量在96 h后极显著或显著下降(P＜0.01;P＜0.05).此外,经CCK8方法检测,Nrf2基因表达沉默后,牛子宫内膜上皮细胞增殖能力减弱.而在tBHQ激活Nrf2试验中,经Western blotting方法检测,tBHQ终浓度为30 μmol/L时Nrf2蛋白表达量最高,极显著高于对照组(P＜0.01),且HO-1和HOXA10的蛋白表达量与对照组相比也明显上升.结果 表明,本试验设计的siRNA-1672能特异性地抑制牛子宫内膜上皮细胞Nrf2的表达,而抑制Nrf2的表达会导致牛子宫内膜上皮细胞增殖能力下降,且Nrf2对牛子宫内膜上皮细胞HO-1和HOXA10基因表达存在调控作用.

关键词：牛、RNA干扰、子宫内膜上皮细胞、Nrf2基因、HO-1基因、HOXA10基因

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分类号：S814.8(普通畜牧学)

资助基金：武汉市农业科学院创新基金项目CX201806;武汉市国际科技合作计划项目2017030209010261

在线出版日期：2019-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1567-1575