鸡传染性喉气管炎病毒可视化LAMP快速诊断方法的建立和应用

摘要：

试验旨在建立简易、快速、高效的鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ILTV)检测和诊断方法.根据GenBank上公布的ILTV TK基因序列,设计检测ILTV的特异性环介导的等温扩增(loop media-ted isothermal amplification,LAMP)技术反应引物,通过对LAMP反应体系和反应条件的优化,以及特异性、敏感性和临床样品的检测,建立了ILTV LAMP检测方法.结果显示,以内引物ILT9-FIP和ILT9-BIP、外引物ILT9-F3和ILT9-B3、环引物ILT9-LB和ILT9-LF为LAMP反应引物,反应温度为66℃时,所建立的LAMP检测方法反应效率最高;所建立的LAMP检测方法能够特异性地检测ILTV(匈牙利株和王岗株),不与新城疫病毒(NDV,B株)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV,H52株和H120株)、大肠杆菌、鸡副嗜血杆菌、巴氏杆菌等发生交叉反应,且能够检测到的病毒最低浓度达到0.06 pg/μL,其灵敏度是普通PCR方法的100倍;采用建立LAM P方法对50个临床样本进行检测,阳性率为14％,且与PCR检测结果的符合率达96％.本研究建立了特异性强、灵敏度高、操作简单的LAMP检测方法,适用于临床上ILTV的快速检测和诊断.

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)、环介导的等温扩增技术(LAMP)、TK基因

所属期刊栏目：46

分类号：S852.65+9.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划2016YFD0500802-4;四川省财政运行专项SASA2014CZYX009;四川省重点研发计划2016NZ003

在线出版日期：2019-04-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：565-572