坏死梭杆菌亚单位疫苗候选抗原蛋白的筛选、表达及免疫原性分析

摘要：

试验旨在筛选坏死梭杆菌 (Fusobacterium necrophorum, Fn) 外膜蛋白 (outer membrane protein, Omp) 中的候选抗原蛋白, 为Fn的亚单位疫苗研究奠定基础.采用Uniprot对Fn Omp序列进行预测, 基于预测结果筛选拟表达蛋白, 并根据GenBank中登录的Fn Omp相应基因序列设计特异性引物, 以QL03株为模板进行PCR扩增、原核表达, 以及SDS-PAGE和Western blotting分析, 并通过血清杀菌试验和小鼠免疫攻毒保护试验, 鉴定重组蛋白的免疫原性, 筛选最佳候选蛋白.结果显示, 预测得到121个蛋白, 顺次命名为1-Fn～121-Fn, 根据预测结果筛选出8-Fn、11-Fn、41-Fn、95-Fn和102-Fn 5个候选蛋白, 其PCR扩增产物大小分别为672、1 164、570、1 059、729bp.SDS-PAGE和Western blotting分析显示, 除8-Fn未表达外, 其余4个蛋白均成功表达, 大小分别为60、39、59、44ku, 命名为P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn, 均能与Fn阳性血清反应.血清杀菌试验结果显示, 4个重组蛋白均有一定杀菌效果, 其中抗P102-Fn血清的杀菌效果最佳, 杀菌率可达40.49％.小鼠免疫保护试验结果显示, P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn对小鼠均具有一定的保护效果, 其中P102-Fn保护效率最高, 达60％.结果表明, P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn均具有良好的免疫原性, 其中P102-Fn的免疫原性及诱导机体产生保护免疫反应能力最佳, 最有望成为Fn亚单位疫苗的候选蛋白.

关键词：坏死梭杆菌、原核表达、外膜蛋白、免疫原性、杀菌试验

所属期刊栏目：46

分类号：S852.61+6.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：四川省财政运行专项SASA2014CZYX009;四川省科技成果转化2017CC0053;四川省重点研发计划2018NZ0003

在线出版日期：2019-05-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：215-222