过表达MAT2A基因促进猪肌内脂肪细胞分化的研究

摘要：

本研究通过构建腺病毒介导的体外超表达载体,探究腺苷甲硫氨酸转移酶2A(methionine adenosyltransferase 2A,MAT2A)基因在猪肌内脂肪细胞分化中的作用.根据GenBank中猪MA T2A基因mRNA序列(登录号:NM_001167650.1)设计引物,提取猪脂肪组织细胞总RNA并反转录获得cDNA,以此为模板进行PCR扩增并连接到pAdTrack-CMV腺病毒穿梭载体中,对重组质粒pAd-MAT2A进行测序鉴定;pAd-MAT2A载体经Pac Ⅰ限制酶酶切线性化,经质粒大片段回收纯化后转染293A细胞进行病毒包装;采用实时荧光定量PCR检测MAT2A基因表达情况,并提取蛋白进行Western blotting分析,取分化第8天的细胞进行油红O染色.结果表明,穿梭载体pAdTrack-CMV-MAT2A构建成功,并能与骨架载体pAdEasy-1实现同源重组;腺病毒载体pAd-MAT2A转染293A细胞后,病毒滴度达到1E+6 PFU/mL,可满足侵染猪肌内脂肪细胞的需要.实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示,MA T2A基因mRNA和蛋白水平均显著上调.油红O染色结果显示,过表达MA T2A基因可促进猪肌内脂肪细胞内脂滴聚积.结果表明,腺病毒介导的MA T2A基因过表达在猪肌内脂肪细胞中呈上调趋势,MAT2A基因可促进脂质积累.

关键词：腺苷甲硫氨酸转移酶2A(MAT2A)基因、重组腺病毒、猪、肌内脂肪细胞

所属期刊栏目：45

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金31702096;河南省教育厅项目18B230010;信阳农林学院校级科技创新团队CXTD-201701

在线出版日期：2018-12-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：2425-2432