羊源类鼻疽伯克霍尔德菌BPSL1467基因克隆、表达及其蛋白生物信息学分析

摘要：

试验旨在克隆和表达羊源性类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,B.pseudomallea)的BPSL1467基因,并对其表达的蛋白进行生物信息学分析.以羊源类鼻疽伯克霍尔德菌(BPHN1株)基因组为模板,参照GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌K96243标准株BPSL1467基因序列设计引物,PCR扩增获得目的基因片段,将所得片段与pET-28a(+)载体连接,构建pET-28a(+)-BPSL1467重组质粒.将鉴定正确的pET-28a(+)-BPSL1467重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,通过IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting 鉴定表达产物.使用DNAMAN、ProtParam、SOPMA和Protscale相关生物信息学软件对BPSL1467基因编码的氨基酸序列进行分析.结果显示,本试验成功克隆了462 bp的BPSL1467基因,诱导表达重组蛋白大小约为22 ku,主要以包涵体的形式存在.BPSL1467蛋白分子式为C763H1209N203O217S6,分子质量为16 890.58 u;其不稳定系数为33.95,属于稳定蛋白;理论等电点(pI)为8.85,为碱性蛋白;总平均疏水性(GRAVY)为-0.190,为亲水性蛋白.该蛋白的二级结构中以无规则卷曲和α-螺旋为主.本试验结果为深入研究羊源类鼻疽伯克霍尔德菌的BPSL1467基因的分子作用机理提供了参考依据.

关键词：类鼻疽伯克霍尔德菌、BPSL1467基因、克隆、原核表达、生物信息学分析

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分类号：S858.26(动物医学（兽医学）)

资助基金：海南省重大科技计划项目ZDKJ2016017-01;国家肉羊产业技术体系CARS-38;中央领导地方科技发展专项资金项目ZY2017HN07

在线出版日期：2018-12-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：2401-2408