V5标记的猪圆环病毒2型Cap蛋白重组杆状病毒表达载体的构建

摘要：

试验旨在利用真核表达系统构建V5标记的猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的表达载体.采用基因工程技术将V5标签引入到PCV2ORF2基因C末端,并将标记基因定向克隆人pFastBacHTA载体,将pFastBacHTA ORF2-V5重组转移载体转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,使用脂质体介导法将鉴定后的重组杆状病毒质粒转染于Sf9细胞中;运用间接免疫荧光试验(IFA)、SDS-PAGE和Western blotting试验对Sf9细胞中V5标记Cap蛋白的表达进行验证.结果显示,本试验成功将V5标签引入到PCV2ORF2基因末端,pFastBacHTAORF2-V5重组转移载体转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞后获得了Bacmid-ORF2-V5重组杆状病毒质粒;IFA、SDS-PAGE和Western blotting试验结果显示,在Sf9细胞中能检测到重组杆状病毒V5标记的PCV2 Cap蛋白,具有良好的反应原性,说明本试验成功获得一株rAcMNPV Cap-V5重组杆状病毒.试验结果为PCV2标记亚单位疫苗的研制提供一定的理论依据.

关键词：猪圆环病毒2型(PCV2)、Cap-V5蛋白、重组杆状病毒、表达载体

所属期刊栏目：45

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金“猪圆环病毒iDNA标记疫苗及其免疫应答效果的研究”31560688

在线出版日期：2018-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1775-1782