牛冠状病毒S基因的序列分析及原核表达

摘要：

为了解牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)的S基因变异情况并建立ELISA检测方法,本研究对采自不同牛场的新生犊牛腹泻(CD)和成年牛冬痢(WD)腹泻样本提取总RNA,反转录合成cDNA,利用PCR扩增S全基因和S1基因.将S1基因目的片段连接表达载体pET-32a(+),并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经PCR、双酶切及测序验证正确后,进行IPTG诱导表达.结果显示,CD与WD分离株S基因核苷酸为98.4％,CD和WD分离株与参考毒株BCoV-ENT株核苷酸同源性最高,分别为98.4％和98.5％,CD分离株与参考毒株SUN5株的同源性最低,为97.5％,WD分离株与FRA/EPI/Caen/2003/13同源性最低,为97.3％cc.通过比对可知,分离株与已知毒株之间存在较大差异,为疫苗候选毒株筛选提供依据.本试验同时构建了pET-32a-S1表达载体,在0.2 mmol/L IPTG诱导5h时,重组菌能在大肠杆菌BL21感受态细胞中产生大量的S1融合蛋白,获得约58 ku表达产物.本试验成功表达了S1蛋白,并对BCoV进行了核苷酸进化分析,为疫苗免疫效果评价方法的建立奠定了基础.

关键词：牛冠状病毒(BCoV)、S基因、序列分析、原核表达

所属期刊栏目：45

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：兽医生物技术国家重点实验室开放课题SKLVBF2018XX

在线出版日期：2018-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1740-1749