定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒游离受体夹心ELISA方法的建立与应用

摘要：

为了建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)游离受体定量检测方法,本试验用表达猪唾液酸黏附素(Sn)游离受体的重组腺病毒rAd Sn4D-Fc感染PK-15细胞,以细胞培养上清纯化的Sn4DFc游离受体作为标准抗原,鼠抗猪Sn免疫血清为一抗,生物素标记兔抗猪Sn多克隆抗体为二抗,建立定量检测Sn4D-Fc游离受体的双抗体夹心ELISA方法;用rAd-Sn4D-Fc注射仔猪,定期采集血清进行游离受体检测.结果显示,纯化Sn4D-Fc标准抗原的纯度为94.3％,能被Sn免疫血清识别;一抗的最佳工作浓度为5 μg/mL蛋白,二抗的最佳稀释度为1∶4 000,夹心ELISA检测标准抗原的灵敏度为0.4 ng/mL,对照抗原无交叉反应;夹心ELISA能从重组腺病毒注射猪血清中检测到Sn4D-Fc游离受体,最高表达量为6.54 ng/mL,持续时间为15d.研究结果表明,建立的双抗体夹心ELISA可用于PRRSV游离受体的体内外定量检测.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、游离受体、夹心ELISA、定量检测

所属期刊栏目：45

分类号：S852.61+4(动物医学（兽医学）)

资助基金：江苏高校优势学科建设工程项目;江苏省农业科技自主创新资金项目CX142087;江苏省自然科学基金BK20151576;江苏农牧科技职业学院重点支持项目NSFPT201631

在线出版日期：2018-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：881-887