水貂生长激素的原核表达及特异性抗血清制备

摘要：

本研究旨在建立水貂生长激素(mink growth hormone,mGH)的原核高效表达体系,探索mGH蛋白规模化生产方法,利用获得的目的蛋白制备特异抗血清.将已构建的原核表达载体pET28b mGH转化大肠杆菌Rosetta (DE3) TM pLysS感受态细胞,经IPTG诱导表达,超声破碎菌体后离心获得包涵体蛋白,利用8 mol/L尿素对其进行溶解和复性,经Ni NTA树脂亲和层析纯化获得重组蛋白.通过Western blotting检测及MAIDI-TOF-MS质谱分析对获得的蛋白进行鉴定.用SDS-PAGE电泳法检测蛋白纯度,用BCA法测定其浓度.复性mGH蛋白与完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂乳化制备免疫抗原,采用皮下多点注射法免疫3只新西兰大白兔,首次免疫剂量为600 μg/只,二免剂量为600 μg/只,三免剂量为400 μg/只.三免10 d后分离制备血清,Western blotting法检测其特异性,间接ELISA法检测其效价.结果表明,原核表达的包涵体经Ni-NTA柱纯化后所得蛋白鉴定为mGH融合蛋白;SDS-PAGE电泳鉴定复性mGH蛋白条带单一,纯度达90％以上,BCA法计算蛋白浓度为669 μg/mL,均达到了免疫动物的要求;制备的抗血清经Western blotting检测具有良好的结合特异性,间接ELISA法测定其抗体效价达1∶256 000以上.上述结果表明,原核表达载体pET28b-mGH可在大肠杆菌Rosetta(DE3)TM pLysS细胞中高效表达mGH融合蛋白,表达蛋白经变性、复性和纯化后免疫新西兰大白兔,可制备高效价特异性抗血清.

关键词：水貂生长激素(mGH)、原核表达、Ni-NTA树脂、质谱分析、兔抗mGH血清

所属期刊栏目：45

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30371064

在线出版日期：2018-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：866-872