10.16431/j.cnki.1671-7236.2018.01.009
熊源粪肠球菌EfaA基因的原核表达
试验旨在构建EfaA基因的原核表达质粒,并对其进行表达.根据GenBank中粪肠球菌EfaA基因序列(登录号:U03756)设计合成l对引物,利用PCR法扩增、克隆EfaA基因,并进行生物信息学分析,将EfaA基因亚克隆于pGEX-4T 1原核表达载体,构建pGEX-4T-EfaA原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达,筛选最佳诱导时间并分析其表达蛋白的生物学特征.结果发现,试验成功获得大小为873 bp的粪肠球菌EfaA基因.经IPTG诱导后,获得分子质量约为59 ku的EfaA重组蛋白,以37℃、0.5 mmol/LIPTG诱导6h表达量最大.经Western blotting分析发现,具有较好的反应原性.本试验成功构建原核表达质粒pGEX-4T-EfaA,并在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中成功表达.
黑熊、粪肠球菌、心内膜炎抗原、原核表达
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S852.61+1(动物医学(兽医学))
延边大学青年基金项目602016032
2018-07-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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