类鼻疽伯克霍尔德菌BPSS0180基因的克隆、原核表达及生物信息学分析

摘要：

试验旨在对类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,B.pseudomallea)的BPSS0180基因进行克隆和原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析.参照GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌K96243标准株BPSS0180基因序列设计1对引物,对类鼻疽伯克霍尔德菌hn-1株进行PCR扩增获得BPSS0180基因片段.将得到的BPSS0180基因连接到pET-28a(+)载体,构建pET-28a(+) BPSS0180重组质粒,转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,提取质粒进行酶切鉴定.鉴定正确后,将构建成功的pET-28a(+)-BPSS0180重组质粒转化到大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blotting进行分析.应用DNAMAN、ProtParam、SOPMA和Protscale对BPSS0180基因序列进行生物信息学分析.结果显示,本试验成功克隆了1146 bp的BPSS0180基因,诱导表达得到的His-BPSS0180融合蛋白大小约为45 ku,且主要以包涵体形式存在.BPSS0180蛋白的分子式为C1779 H2809 N545 O536 S7,分子质量为40.6 ku,消光系数为40575,疏水指数为85.43.其不稳定系数为46.52,属于不稳定蛋白;理论等电点(pI)为5.54,为酸性蛋白;总平均疏水性(GRAVY)是-0.261,为亲水性蛋白.该蛋白的二级结构以α-螺旋(58.79％)和无规卷曲(32.02％)为主,预测其在哺乳动物网织红细胞的半衰期为30 h.本试验结果为进一步探究类鼻疽伯克霍尔德菌的BPSS0180基因提供了一定的理论依据.

关键词：类鼻疽伯克霍尔德菌、BPSS0180基因、克隆、原核表达、生物信息学分析

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分类号：R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：海南省重大科技计划项目ZDKJ2016017-01

在线出版日期：2018-03-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：3313-3319