基于PEDV Nsp7蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

摘要：

本研究旨在建立检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)不同毒株抗体的间接ELISA方法.试验以纯化的非结构蛋白7(nonstructural protein 7,Nsp7)作为包被抗原,通过优化ELISA反应条件建立了PEDV不同毒株抗体检测的间接ELISA方法.结果显示,其最佳反应条件为:抗原包被量为0.2 μg/孔,包被条件为37℃孵育1h后4℃过夜;血清稀释度为1∶300,作用时间为2h;酶标二抗最适稀释度为1∶10 000,作用时间为1.5 h;TMB显色液作用时间为15 min.在优化条件下,临界值的判定标准为:样品S/P值＞0.1694判为阳性,S/P值＜0.1398判为阴性.所建立的ELISA方法特异性、重复性及敏感性均良好.用所建立的ELISA方法对40份来自于疑似猪PEDV血清样品进行检测,该方法与商品化试剂盒检测之间的符合率为95％.本研究建立的ELISA方法在临床上可用于PEDV不同毒株抗体水平的检测,也有用于PEDV早期诊断的潜质,从而为制定有效防控PEDV的措施提供一定的参考依据.

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV)、非结构蛋白7(Nsp7)、间接ELISA

所属期刊栏目：44

分类号：S852.65+9.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：河南省高校科技创新团队支持计划14IRTSTHN015;郑州市国际合作交流项目153PGJHZ203

在线出版日期：2018-03-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：3306-3312