猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

摘要：

为建立一种快速、敏感、特异的猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)实时荧光定量PCR检测方法,本研究根据GenBank中CSFV E2基因保守区域序列,设计了一对特异性引物和一条特异性探针,以CSFV总RNA为反转录模板,经优化反应条件,建立CSFV 实时荧光定量PCR检测方法,并对其进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法对35份临床疑似CSFV感染样品进行了检测.结果表明,本研究建立的CSFV实时荧光定量PCR检测方法在101~106拷贝/μL范围内有很好的线性关系,相关系数为0.999;CSFV细胞培养物出现阳性扩增信号,但ST正常细胞对照和其他8种病原对照未出现扩增,特异性良好;该方法重复性好、敏感性高,最低检测模板浓度为10 拷贝/μL,并且CSFV的最低检测限为1 TCID50/mL;自35份疑似CSFV感染样品中检出19份阳性样品,与本课题组建立的CSFV Nested RT-PCR检测结果和克隆测序结果一致.本研究成功建立了CSFV实时荧光定量PCR检测方法,可用于CSFV的快速检测.

关键词：猪瘟病毒、实时荧光定量PCR、特异性、重复性、敏感性、应用

所属期刊栏目：44

分类号：S852.65+1(动物医学（兽医学）)

资助基金：河南省科技创新人才计划项目"猪重要疫病快速检测集成技术研究"174200510003

在线出版日期：2017-08-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：2112-2118