抗头孢氨苄单克隆抗体的制备与初步应用

摘要：

为制备抗头孢氨苄(cephalexin,CEX)的单克隆抗体并建立鲜奶中CEX残留检测的ELISA方法,本试验采用戊二醛两步法分别将CEX与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶联,用合成的CEX-BSA作为免疫原免疫BALB/c雌鼠;5次免疫后,应用杂交瘤细胞融合技术建立并筛选出两株(2G4、5B3)分泌抗CEX单克隆抗体(monoclonal antibodies,McAb)的杂交瘤细胞株,将2G4细胞株注入BALB/c小鼠腹腔制备腹水,并对腹水进行纯化及鉴定.结果显示,2G4腹水效价大于1∶1.28×105,其抗体亚型为IgG2b(κ),亲和力常数K=1.51×109 L/mol;交叉试验结果显示,该单克隆抗体除了与头孢拉定有52.55%的交叉反应率外,与头孢噻呋、头孢曲松、头孢噻肟、头孢噻吩、青霉素、链霉素、四环素均无明显交叉反应;建立了测定鲜奶样品中CEX的ELISA方法,线性范围为20~1 000 ng/mL,线性方程y=0.4674x-0.5359(R2=0.9909),检测下限为19.68 ng/mL,平均回收率为91.31%,平均变异系数低于15%,低于中国及欧盟规定的头孢氨苄最高残留限量,具有一定的应用前景.

关键词：单克隆抗体、头孢氨苄、ELISA、人工抗原

所属期刊栏目：44

分类号：S859.79+6(动物医学（兽医学）)

资助基金：江苏高校优势学科建设工程;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;江苏省高校重点实验室开放课题

在线出版日期：2017-06-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1159-1167