KLF3基因3′-UTR区双荧光素酶报告载体及其突变载体的构建与活性鉴定

摘要：

试验旨在构建锌指蛋白3(KLF3)基因3′-UTR区双荧光素酶基因报告载体及其突变载体,初步分析可能调控KLF3基因表达的miRNAs.首先通过PCR方法扩增KLF3基因的3′-UTR序列,将其克隆到经Xho Ⅰ、Not Ⅰ双酶切的双荧光素酶报告载体中;运用Targetscan软件预测可能与KLF3基因3′-UTR相互作用的miRNA;使用脂质体2000转染试剂将miRNAs mimics与构建好的KLF3基因3′-UTR段双荧光素酶报告载体或突变载体共转染于常规培养的293T细胞中,检测荧光素酶活性.结果表明,KLF3基因3′-UTR可能是miR-21的作用靶位点;双荧光报告显示,miR-21 mimics组(0.6900±0.0144)比突变组(1.000±0.0688)和空白对照组(1.000±0.0159) KLF3基因3′-UTR双荧光素酶基因报告载体和突变载体的活性降低了31%(P<0.01).本试验成功构建了含有KLF3基因3′-UTR段双荧光素酶基因报告载体与突变载体,初步证实miR-21对KLF3基因有调控作用.

关键词：KLF3基因、双荧光素酶基因报告载体、miR-21、3′-非编码区

所属期刊栏目：44

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家863资助项目2013AA102506;国家绒毛用羊产业技术体系CARS40-16;国家科技支撑计划子课题2011BAD28B05-1-5;吉林省博士后科研人员科研项目0010424;吉林省农业科学院博士后科研项目2060599

在线出版日期：2017-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：644-650