10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.01.030
伽氏疏螺旋体尚志株P66基因的原核表达与鉴定
为获得伽氏疏螺旋体尚志株(B .garinii SZ)的 P66蛋白,本研究从培养的螺旋体菌液中提取总 RNA,反转录合成第一链 cDNA,利用 PCR 扩增 P 66基因。将目的片段连接表达载体 pET-30a(+),并转化大肠杆菌表达菌 BL21(DE3),经 PCR、双酶切及测序验证正确后,进行 IPTG 诱导表达和纯化,然后将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。SDS-PAGE 结果显示,获得约70 ku 的表达产物;Western blotting 分析表明,表达产物与抗 His 标签的小鼠单克隆抗体、螺旋体鼠源阳性血清、兔抗 P66多克隆抗体均能发生反应,获得的多克隆抗体也可识别天然蛋白。本试验成功表达了 B .garinii SZ 株 P66蛋白,并制备了多克隆抗体,为后续 B .garinii SZ 株P66蛋白的功能研究奠定了基础。
伽氏疏螺旋体尚志株、P66、原核表达、多克隆抗体
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S852.63(动物医学(兽医学))
农业科技创新工程ASTIP;国家肉牛牦牛产业技术体系NBCIS CARS-38
2017-03-09(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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