水貂白细胞介素-4基因的克隆、序列分析与原核表达

摘要：

为了获得高纯度的白细胞介素-4（IL-4）蛋白，对分离得到的水貂外周血淋巴细胞经植物血凝素（PHA）诱导后，提取淋巴细胞总 RNA，根据 GenBank 中登录的雪貂 IL-4基因序列，设计并合成特异性引物，通过 RT-PCR扩增获得了水貂 IL-4基因序列全长399 bp，编码132个氨基酸，与雪貂氨基酸序列同源性高达99．2％，与熊猫、犬同源性均为90．0％。将编码成熟蛋白基因构建到原核表达载体 pProEX-HTb，IPTG 诱导后，SDS-PAGE 及Western blotting 结果显示，IL-4表达产物为15 ku 的包涵体蛋白。通过 His-Trap HP 亲和层析预装柱变性、复性洗脱可获得高纯度的重组 IL-4蛋白。本试验为水貂 IL-4基因的进一步研究奠定了基础。

关键词：水貂、白介素-4、序列分析、原核表达

所属期刊栏目：44

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：吉林省科技发展计划项目20140520172JH；吉林省科技发展计划项目20140307002NY、20140204072NY

在线出版日期：2017-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：30-37