鸽白细胞介素8基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：

为建立鸽白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)基因实时荧光定量 PCR 检测方法,本研究根据 GenBank 上公布的鸽 IL-8基因序列,在保守区域设计1对特异性引物,以鸽子淋巴细胞提取的核酸为模板扩增鸽 IL-8基因部分片段并克隆到 pMD18-T 载体上。提取重组质粒通过系列制备标准品,建立鸽 IL-8基因 SYBR GreenⅠ染料法实时荧光定量 PCR 标准曲线,并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果显示,实时荧光定量 PCR 熔解曲线呈单一熔解峰,试验线性相关系数为1.0,IL-8基因的扩增效率为103%。敏感性结果显示最低可检测到16个拷贝数；用该方法检测其他鸽白细胞介素细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-18)和双蒸水的结果均为阴性。批间、批内变异系数均≤1.52%。因此,本研究建立的实时荧光定量 PCR 检测方法可用于鸽 IL-8 mRNA 的检测,为病毒感染宿主细胞后细胞因子表达的定量分析奠定基础。

关键词：鸽、白细胞介素8、实时荧光定量PCR

所属期刊栏目：43

分类号：S854.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目31360612；广西自然科学基金项目2013GXNSFAA019080

在线出版日期：2016-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2547-2552