Nsp9基因实时荧光定量PCR检测方法的建立及其在感染细胞过程中表达量的变化

摘要：

试验旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV) Nsp 9基因的实时荧光定量 PCR 检测方法,并探究其在感染细胞过程中表达量的变化。根据 PPRSV Nsp 9基因序列设计引物,建立基于 SYBR Green Ⅰ检测模式的实时荧光定量 PCR。结果显示,PRRSV Nsp 9基因在1×104~1×108拷贝/μL 范围内有很好的线性关系,扩增产物的熔解曲线只有1个单特异峰,无引物二聚体。该方法与猪戊肝病毒(HEV)、猪流感病毒(SIV)、伪狂犬病病毒(PRV)基因组均无交叉反应,可重复性好,组内变异系数小,可用于临床 PRRSV 检测。在病毒感染细胞过程中,Nsp 9基因表达量逐步升高,36 h 达到最高。本研究为探究病毒复制规律与临床疫苗生产奠定了理论基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒、SYBRGreenⅠ、实时荧光定量PCR、Nsp9基因

所属期刊栏目：43

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白 Nsp9功能研究项目31272564；公益性行业农业科研专项经费201203039；国家生猪现代农业产业技术体系CARS-36项目；国家重点研发计划课题2016YFD0500707

在线出版日期：2016-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：2534-2540