PEDV、TGEV和PRoV多重RT-PCR检测方法的建立及应用

摘要：

为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)及猪轮状病毒(PRoV)的快速鉴别检测方法,本试验针对 PEDV、TGEV、PRoV 的基因组序列设计3对特异性引物 PEDV-N、TGEV-M 和 PRoV-VP6,分别扩增 PEDV N 基因、TGEV M 基因和 PRoV VP 6基因。经优化反应条件,成功建立了能同时检测并区分PEDV、TGEV、PRoV 的多重 RT-PCR 方法。该方法可特异扩增 PEDV、TGEV、PRoV 相应的基因片段,而与猪瘟病毒(CSFV)、猪口蹄疫病毒(FMDV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)均无交叉反应；对 PEDV、TGEV、PRoV 基因重组质粒标准品的检出限分别为1.41×103、1.41×102和1.41×103拷贝/μL；在相同条件下重复试验可获得一致的结果。应用该方法对临床采集的190份腹泻病料进行检测,结果PEDV 阳性42份,阳性率22.11%；TGEV 阳性58份,阳性率30.53%；PRoV 阳性34份,阳性率17.89%,且存在不同病毒混合感染的现象。结果表明,所建立的多重 RT-PCR 方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的优点,可用于 PEDV、TGEV 和 PRoV 的临床检测和流行病学调查。

关键词：猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、多重RT-PCR、检测方法

所属期刊栏目：43

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：广西水产畜牧科技项目桂渔牧科201528017

在线出版日期：2016-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：2518-2526