利用脂质体法建立转Toll样受体4基因大尾寒羊胎儿成纤维细胞株的研究

摘要：

利用脂质体转染法获得转Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)基因的成纤维细胞,将其作为供体细胞,再通过体细胞核移植技术构建重构胚,最终生产出转TLR4基因且性别可控的大尾寒羊.本研究通过原代培养大尾寒羊胎儿皮肤成纤维细胞,并进行SRY基因性别鉴定,利用脂质体转染法转入TLR4基因,然后分别从形态学与分子水平检测TLR4基因的表达,将稳定表达转TLR4的成纤维细胞核移植入绵羊去核卵母细胞中构建重构胚.最终获得5个稳定表达TLR4的阳性细胞克隆,经SRY基因性别鉴定为雌性细胞株,通过实时荧光定量PCR分析,在第4代转染的细胞中TLR4表达量最高,比未转染细胞高出7.4816倍(P＜0.01),卵裂的重构胚中有EGFP的表达.试验成功构建出含TLR4基因的重构胚,为今后生产出性别可控的抗病转基因绵羊地方新品种奠定基础.

关键词：大尾寒羊、脂质体转染、TLR4基因、重构胚

所属期刊栏目：43

分类号：Q813(生物工程学(生物技术))

资助基金：2013年度北京市教委北京市属高等学校创新团队建设与教师职业发展计划项目“体细胞转基因克隆肉牛新品系培育与利用”PXM2013_014207_000067;2014年度国家科技重大专项“转基因生物新品种培育”一级子课题“抗病转基因羊扩繁体系初步建立”研究2014ZX08008005-003;2013年度国家自然基金面上项目“牛体内外植入前胚胎IFNτ的差异表达及对子宫上皮细胞ISG15和Wnt7a表达的体外诱导”31272526

在线出版日期：2016-08-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1125-1132