牛流行热病毒糖蛋白基因的原核表达与抗原性鉴定

摘要：

为探索可用来开发牛流行热病毒(bovine ephemeral fever virus,BEFV)疫苗和诊断试剂的候选基因,本研究针对BEFV糖蛋白(G)基因设计了2对特异性引物,用PCR方法扩增基因片段,PCR产物经Xho Ⅰ和NdeⅠ双酶切后亚克隆到表达载体pET 30上,将鉴定正确的重组质粒(480-pET 30、1107 pET-30)转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,培养阳性菌株D600nm值为0.6～1.0,37℃下用1.0 mmol/L IPTG诱导表达目的蛋白,将其纯化之后进行SDS-PAGE和Western blotting免疫原性分析.同时,应用间接ELISA、动物免疫试验及交叉反应试验对目的蛋白进行分析.结果表明,首次发现的1 107 bp基因片段是分段表达的,具有很好的生物活性和特异性,更适合作为开发疫苗和诊断试剂的候选基因,为今后建立BEFV的血清学诊断方法及疫苗研发提供了理论基础.

关键词：牛流行热病毒、原核表达、免疫原性分析

所属期刊栏目：42

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：农业科技创新工程AST1P;国家农业公益性行业科研专项“重要牛羊虫媒病毒病防控关键技术研究与应用”项目201303035;国家肉牛牦牛产业技术体系NBCIS-CARS-38

在线出版日期：2016-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：2246-2253