猪札幌病毒VPg基因的原核表达及免疫原性研究

摘要：

为获得猪札幌病毒病毒基因组连接蛋白(viral protein genome-linked,VPg),本试验以中国西北地区猪札幌病毒CH430株RNA为模板,通过RT-PCR扩增VPg基因,将其克隆至pMD19-T Simple Vector,双酶切及基因测序鉴定后,再亚克隆至pET-30a中构建重组质粒,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达.将纯化的目的蛋白免疫家兔得到超免疫血清.结果显示,获得的VPg基因全长为339 bp,编码113个氨基酸.SDS-PAGE结果显示,重组菌在37℃、1.0 mmol/L IPTG诱导表达6h时重组蛋白表达量最高,表达的目的蛋白主要以包涵体的形式存在,大小为22 ku,与预期结果相符.Western blotting分析结果表明,该重组蛋白与超免疫血清具有良好的反应原性.超免疫血清ELISA效价可达1∶12 800,且具有良好的特异性.本试验获得的超免疫血清为研究猪札幌病毒非结构蛋白VPg的结构与功能奠定了基础.

关键词：猪札幌病毒、病毒基因组连接蛋白(VPg)、原核表达、纯化

所属期刊栏目：42

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家国际科技合作专项2011DFA31830

在线出版日期：2016-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：816-822