3种猪细胞因子mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

摘要：

为建立猪细胞因子SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank中3种重要的猪细胞因子即猪白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、α-干扰素(interferon α,IFN-α)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis fac-tor,TNF-α)的基因序列,设计特异引物扩增目的基因.将3种基因克隆至pMD18-T载体上,得到各自阳性克隆质粒,以3种阳性质粒为标准品建立标准曲线并进行熔解曲线分析以及灵敏性、特异性和重复性试验.结果表明,当标准品稀释度为1×101～1×106拷贝/μL时,3种基因的Ct值与浓度间具有良好的线性关系,相关系数均≥0.992.熔解曲线分析表明,产物为特异性单峰且重复性较好.应用建立的方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) TJM-F92株免疫的30日龄猪外周血单核细胞(PBMC)中IL-12、IFN-α和TNF-α表达量进行检测,结果发现,免疫了PRRSV TJM-F92株的猪PBMC细胞内3种细胞因子表达量均极显著升高(P＜0.01).研究结果为IL-12、IFN-α和TNF-α的定量分析提供了技术平台.

关键词：猪、细胞因子、SYBR Green Ⅰ、实时荧光定量RT-PCR

所属期刊栏目：42

分类号：S828(家畜)

资助基金：国家高技术发展计划项目国家“863”计划项目2011AA10A213;吉林省科技发展计划项目20121823

在线出版日期：2016-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：24-31