马疱疹病毒1型LAMP检测方法的建立

摘要：

本试验旨在建立一种检测马疱疹病毒1型(EHV-1)的快速、灵敏、特异的环介导等温扩增技术(LAMP),同时评价该方法的可靠性.根据马鼻肺炎糖蛋白B(gB)基因特异保守序列设计多对LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测反应进程,进行引物筛选和反应条件的优化,建立能特异性扩增EHV-1 DNA的LAMP检测方法,并加入SYBR GreenⅠ通过肉眼判断结果.该方法在65℃恒温下作用50 min,使EHV-1 DNA获得了高效率的特异性扩增,与其他马易感病毒如马疱疹病毒4型(EHV 4)等无交叉反应;且具有极高的灵敏性,可检测到10-4稀释的目标病毒,比普通PCR的灵敏度高10倍;反应结束后加入SYBR GreenⅠ肉眼观察的结果与LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测结果一致.通过将4份临床样品的LAMP检测结果与已得到验证的PCR结果进行比对,结果显示符合率为100％.本研究建立的LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏、简单易操作且设备要求低等特点,具有实地检测EHV-1的前景.

关键词：马疱疹病毒1型、环介导等温扩增技术、快速检测

所属期刊栏目：41

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家科技支撑计划课题“马匹疫病诊断及综合防控技术研究与示范”2012BAD46B00;新疆维吾尔自治区重大专项“马运动、肉用、乳用生产关键技术研究与示范”201130101

在线出版日期：2016-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：35-40