猪繁殖与呼吸综合征活疫苗中病毒含量荧光定量PCR测定方法的建立及初步应用

摘要：

为建立快速、敏感、特异的评价猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)活疫苗中病毒含量的方法,根据GenBank中登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因序列设计合成了标准品引物和定量引物,RT-PCR扩增PRRSV基因片段并连接到pMD19-T载体上,构建标准品质粒pMD19-T-PRRSV.采用SYBR Green Ⅰ染料法进行荧光定量PCR检测,分析标准曲线并进行特异性、稳定性、重复性试验.结果显示,该方法检测病毒含量为7.43×100～7.43×108拷贝/μL,标准品各稀释度质粒拷贝数与Ct值之间相关系数高(R2 =0.9989),引物特异性强.应用该方法对6个厂家PRRS活疫苗中的病毒含量进行测定,发现不同厂家生产的疫苗中病毒含量差异较大,最高差异可达47.9倍.本试验建立的检测PRRS活疫苗病毒含量的荧光定量PCR方法可用于疫苗生产过程中及免疫动物前疫苗质量的评价.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征活疫苗、荧光定量PCR、应用

所属期刊栏目：41

分类号：S858.28(动物医学（兽医学）)

在线出版日期：2016-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：71-76