猪圆环病毒2型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立
采用PCR方法克隆了猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)衣壳蛋白(capsid protein,CAP)基因,构建了重组质粒p-18T-CAP,并将其作为标准阳性模板.参照GenBank收录的PCV2ORF2基因设计合成1对特异性的引物和与该引物相匹配的特异探针,通过对反应条件进行优化,以定量的10倍系列稀释的质粒p 18T-CAP为标准品进行TaqMan荧光定量PCR扩增,建立了一种检测PCV2的TaqMan荧光定量PCR方法.试验结果显示,该方法与猪圆环病毒1型、猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪瘟病毒等均无交叉反应;该方法最低可检测到4.53×10 2拷贝/μL,比PCR检测方法高100倍;其标准曲线线性范围是102~109拷贝/μL,且具有良好的重复性.
猪圆环病毒2型、荧光定量PCR、TaqMan探针
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Q78(基因工程(遗传工程))
天津市应用基础与前沿研究计划重点项目11JCZDJC17700
2016-05-06(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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