猪细环病毒2型衣壳蛋白的原核表达及纯化
本试验通过在大肠杆菌中表达衣壳蛋白,确定最优表达条件并对其进行纯化.用PCR法扩增猪细环病毒2型(TTV2) ORF1抗原基因,定向克隆至质粒pGEX-4T-1中,获得重组质粒pGEX-4T-1-ORF1.经双酶切鉴定及测序正确后转化到BL21 (DE3)工程菌中,获得衣壳蛋白大肠杆菌表达株.IPTG诱导表达,表达的重组融合蛋白经SDS-PAGE及Westernblotting鉴定,并对影响重组蛋白表达的3个因素,即诱导时间、诱导温度和IPTG浓度进行优化,确定最优表达条件.重组表达质粒PCR及双酶切鉴定结果显示衣壳蛋白原核表达载体构建正确.重组融合蛋白分子质量约80 ku,主要以包涵体形式存在.37℃诱导5h表达量最多,IPTG浓度对表达量无明显影响.蛋白质串联肽谱分析检测氨基酸序列与GenBank中公布的TTV2ORF1基因序列翻译的氨基酸序列相对应,且可被鼠抗GST单克隆抗体特异性识别.该融合蛋白首次用KCl染色切胶回收法对表达的融合蛋白进行纯化,纯化效果较好,性价比高.结果表明,成功构建了pGEX-4T-1-ORF1重组质粒,衣壳蛋白得到了高效表达及纯化,为间接ELISA的建立及单克隆抗体的研制提供了抗原.
猪细环病毒2型、衣壳蛋白、原核表达、纯化
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S852.65(动物医学（兽医学）)
2016-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
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