布鲁氏菌和鹦鹉热衣原体双重PCR检测方法的建立与应用

摘要：

为建立同时检测布鲁氏菌和鹦鹉热衣原体的双重PCR方法,本研究据GenBank上已发表的具有属间特异性的布鲁氏菌bp26基因和鹦鹉热衣原体23S rRNA基因,利用Primer Premier 5.0软件各设计1对特异性引物,扩增的目的片段长度分别为219和356 bp.通过优化反应条件,建立了能同时检测布鲁氏菌和鹦鹉热衣原体的双重PCR方法.该方法具有较好的特异性和可重复性,对2种基因单重PCR检测敏感性均达到3.1×10 2拷贝/反应,双重检测的灵敏度为3.1×103拷贝/反应.利用该双重PCR方法对流产牛抗凝全血、血清、流产胎儿及奶液共172份临床疑似布鲁氏菌感染的样品进行检测,检测到布鲁氏菌阳性样品53份,鹦鹉热衣原体阳性样品2份,以上这2种病原的阳性检出率分别为30.8％和1.2％,且检测到2种病原混合感染的阳性样品2份,阳性检出率为1.2％.临床应用结果表明,该方法可用来对布鲁氏菌和鹦鹉热衣原体进行同步、快速、灵敏的检测.

关键词：布鲁氏菌、鹦鹉热衣原体、双重PCR、共扩增

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分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家质量监督检验检疫总局科研项目2014IK239、2011IK017;质检公益专项20111024

在线出版日期：2016-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：7-11