Ⅰ型鸭肝炎病毒VP3基因的克隆及原核表达

摘要：

采用RT-PCR方法从Ⅰ型鸭肝炎病毒ZJ-Ⅴ株中扩增VP3基因,运用DNAStar软件对VP3序列与参考序列的同源性进行比对,并进行了遗传进化分析,然后将VP3基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得重组表达质粒pET-VP3,转化宿主菌E.coli Rosetta(DE3),经1 mmol/L IPTG诱导表达后用SDS-PAGE和Western blotting方法对表达产物进行检测.结果显示,成功克隆了DHV-Ⅰ VP3基因,片段大小为711 bp.序列分析结果表明,ZJ-Ⅴ株VP3与其他A型DHV分离株的同源性较高,为95.1％～97.7％;而与C型DHV分离株的同源性较低,为71.3％～72.6％;与B型DHV分离株的VP3基因同源性最差,为70.3％～70.5％. SDS-PAGE和Western blotting检测结果显示,重组VP3基因在大肠杆菌细胞(DE3)中获得了良好表达,其分子质量约为47 ku;与抗Ⅰ型鸭肝炎病毒ZJ-Ⅴ株阳性血清发生特异性免疫反应,表明重组VP3蛋白具有良好免疫原性.

关键词：Ⅰ型鸭肝炎病毒、VP3基因、原核表达、序列分析

所属期刊栏目：40

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金项目31101848,31270194;公益性农业科研专项201003012;"863"计划2011AA10A200;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项2012JB06,2012JB13

在线出版日期：2016-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：33-37