悬浮培养Sf21细胞高效表达牛γ-干扰素及其特性鉴定

摘要：

本试验旨在研究重组牛γ-干扰素(rBovIFN-γ)在Sf21细胞中高效表达及其特性鉴定.利用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从奶牛外周血淋巴细胞的总RNA中扩增出不含信号肽的BovIFN-γ基因片段.将其克隆到pFastBacTMHTA中构建重组质粒pFastBacTM HTA-BovIFN-γ.然后将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞获得重组穿梭质粒rBacmid-BovIFN-γ.转染Sf21昆虫细胞后获得重组杆状病毒rBac-BovIFN-γ,应用Sf21细胞悬浮培养技术大量表达rBovIFN-γ.利用Western blotting、质谱分析(MS)、抗病毒试验等对rBovIFN-γ进行鉴定.Western blotting分析显示,rBovIFN-γ具有良好的反应原性；MS分析表明,rBovIFN-γ的6个肽段序列与牛IFN-γ的氨基酸序列完全匹配,在蛋白质质谱数据库中搜索结果为牛IFN-γ; MDBK/VSV抗病毒试验显示,rBovIFN-γ具有很高的抗病毒活性,为1.05×105 IU/mg.

关键词：牛γ-干扰素、杆状病毒、悬浮培养、质谱分析、抗病毒活性

所属期刊栏目：39

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：公益性行业农业科研专项经费项目200903027;863计划SQ2011AAJY2746,2012AA101302;中央级公益性科研院所基本科研业务费2010js-1,2011js-3;"十一五"国家科技支撑计划重点项目2010BAD04B02;2011年及2012年农业部动物疫情监测与防治项目

在线出版日期：2013-01-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1-6