Arkadia表达载体转染肾小管上皮细胞条件的优化

摘要：

本试验旨在优化泛素化酶Arkadia质粒表达载体pGPU6/GFP/Neo转染小鼠肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)的条件,为研究Arkadia表达载体在小鼠马兜铃酸肾病(aristolochic acid nephrohathy,AAN)中的作用奠定基础.以小鼠RTECs为转染对象、脂质体LipofectamineTM 2000为转染介质,采用Real-time PCR和CCK-8法检测不同的质粒与脂质体比例条件下Arkadia mRNA的表达差异及对细胞活性的影响；同时,用Real-time PCR检测不同的转染时间条件下表达载体对Arkadia mRNA沉默效果的差异.结果显示,Arkadia- pGPU6/GFP/Neo载体的转染效率表现出了一定的剂量和时间依赖性.当质粒DNA∶LipofectamineTM 2000为0.66 μg∶2 μL、转染时间为24 h时,对Arkadia mRNA表达的抑制最明显并且对细胞的毒性最小.最终确定了Arkadia-pGPU6/GFP/Neo载体转染小鼠RTECs的最佳条件.

关键词：Arkadia、表达载体、转染、肾小管上皮细胞、优化

所属期刊栏目：39

分类号：Q813(生物工程学(生物技术))

资助基金：北京市自然科学基金项目6092004、51022014;国家自然科学基金31172362、30972215;北京市属高校人才强教计划资助项目

在线出版日期：2012-11-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：44-47