麇鹿重组朊蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定

摘要：

为研制鹿慢性消耗性疾病(chronic wasting disease,CWD)单克隆抗体,本研究以原核表达后经纯化的麋鹿重组成熟朊蛋白(PrPc)为免疫原免疫PrP基因敲除小鼠(PrPc-null mice).两次加强免疫后,利用淋巴细胞杂交瘤技术,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,采用3次有限稀释法实现杂交瘤细胞的亚克隆,筛选出5株能稳定分泌针对麋鹿重组成熟朊蛋白特异性单克隆杭体(McAbs)的杂交瘤细胞株5A5、3B2、6D12、5E3、1F5,其腹水ELISA效价均达到1:10000以上.经鉴定,5株单抗均为IgG抗体,5A5、6D12、5E3株为IgG1亚类,3B2、1F5株为IgG2a亚类.Western blotting鉴定结果表明,获得的McAbs均能特异性识别糜鹿重组成熟朊蛋白和健康麋鹿脑组织匀浆中的PrPc.本研究制备了CWD腹水McAbs,同时也为CWD的研究及其诊断方法的建立奠定了基础.

关键词：麋鹿、重组PrPc蛋白、单克隆抗体、Western blotting

所属期刊栏目：39

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家公益性行业农业科研专项200903037

在线出版日期：2012-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：69-71